1、分光光度的分類與基本工作原理光電比色計(jì)采用濾光片獲得單色光,因?yàn)闉V光片性能較差,只能得到近似的單色光,因而影響了光電比色計(jì)的靈敏度與準(zhǔn)確度。而采用分光光度法,又同時(shí)提高儀器的靈敏度。有的儀器又同時(shí)用特制的光電管代替光電池,則又?jǐn)U大了使用的光譜區(qū)范圍。 分光光度法是通過(guò)分光系統(tǒng)(又稱色散系統(tǒng))將復(fù)合光渡分成一系列波長(zhǎng)的單色光,其中某一波長(zhǎng)的單色光,可根據(jù)被測(cè)物質(zhì)對(duì)某一渡長(zhǎng)光渡的吸收強(qiáng)弱來(lái)選取。 分光光度計(jì)的分光系統(tǒng)又稱單色器,通常是采用援鏡將復(fù)合光分成單色光;其它部分的的造與光電比色計(jì)基本相同。 (1)分類(2)基本工作原理分光光度法的定量關(guān)系也可用朗伯一比爾定律表示。分光光度法比光電比色法的靈敏度高,其靈敏度的表示方法有兩種二摩爾吸光系數(shù)e和禁德爾(SandeJ1)靈敏度S(又稱為靈敏度指數(shù)9)。 根據(jù)朗伯一比爾定律(式7-4)可知,大多數(shù)顯色反應(yīng)的摩爾吸光系數(shù)為10~105,該值越大,表示該顯色反應(yīng)靈敏度越高。 2、分光光度計(jì)的構(gòu)造與使用以721型分光光度計(jì)0為例介紹其構(gòu)造與使用。 721型分光光度計(jì)適用手在可見光譜區(qū)的范圍360~800nm內(nèi)進(jìn)行定量比色分析用。儀器在410~710nm之間可增加消光片或采用有色溶液作被測(cè)溶液的陪襯代替空自,以便提高分析靈敏度和提高消光讀數(shù)范圍。 (1)儀器的結(jié)構(gòu)儀器由光源燈部件、單色光器部件、入射光與出射光調(diào)節(jié)部件、比色皿座部件、光電管暗盒(電子放大器)部件、穩(wěn)壓電源部件等幾部分組成。其結(jié)構(gòu)原理圖見圖7-11,內(nèi)部結(jié)構(gòu)示意圖見圖7-12。 (2)光學(xué)系統(tǒng)721型分光光度計(jì)采用自準(zhǔn)式光路、單光束方法,其波長(zhǎng)范圍360~800nm,用鎢絲白類、燈泡作光源,光學(xué)系統(tǒng)示意圖見圖7-13。 由光源燈發(fā)出的連續(xù)輻射光線,射到聚光透鏡上,會(huì)聚后再經(jīng)過(guò)平面鏡轉(zhuǎn)角90°,反射至入射狹鐘。光線到達(dá)單色光器內(nèi),狹鐘正好位子球面準(zhǔn)直鏡的焦面上,當(dāng)入射光線經(jīng)過(guò)準(zhǔn)直鏡反射后就以一束平行光射向接鏡(該接鏡的青面鍍將),光線進(jìn)入接鏡后,就在其中色散,入射角在zui小偏向角,入射光在鋁面上反射后是依原路稍偏轉(zhuǎn)一個(gè)角度反射回來(lái),這樣從接_鏡色散后出來(lái)的光線再經(jīng)過(guò)物鏡反射后,就會(huì)聚在出光狹鐘上,出射狹鐘和入射狹縫是一體的,為了減少譜線通過(guò)接鏡后呈現(xiàn)彎曲形狀對(duì)于單色性的影響,因此把狹整的兩片刀口做成孤形的,使其近似地吻合譜線的彎曲度,保證了儀器有一定幅度的單色性。 |
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