凝膠色譜柱操作 1. 腫脹
??市售凝膠為干顆粒，一般為40~63um。凝膠在使用前需要在洗脫液中充分溶脹一到幾天。如果將濕凝膠在沸水浴中逐漸加熱至接近沸騰，溶脹時間可縮短至1～2小時。凝膠溶脹必須*，否則會造成色譜柱不均勻。熱溶脹法還可以殺死凝膠中產生的細菌，去除凝膠中的氣泡。
?? 2、裝柱
??由于凝膠的分離取決于篩分效果，因此對凝膠的填充要求非常高。整個填充柱必須非常均勻，否則必須重新填充。凝膠上柱前，可通過水浮去除凝膠中的單體、粉末和雜質，并通過真空泵排出凝膠中的氣泡。最好在商品中購買玻璃或有機玻璃凝膠空柱。塔的兩端有平篩或篩板。將色譜柱垂直固定，加入少量流動相以消除柱底氣泡，并加入一些流動相至色譜柱高度的1/4左右。柱頂接漏斗，頸徑約為柱頸的一半，然后在攪拌下緩慢、均勻、連續地加入脫氣的凝膠懸浮液，同時打開色譜柱的毛細管出口，保持適當的流量率，凝膠顆粒會逐層水平上升，并均勻地沉積在柱子中，直到達到所需的高度。取出漏斗后，用較小的濾紙輕輕蓋住凝膠床表面，然后用大量洗脫液沖洗凝膠床一段時間。
?? 3. 色譜柱均勻性檢查
??凝膠色譜的分離效果主要取決于色譜柱是否裝填均勻。在分離樣品之前，必須檢查色譜柱的均勻性。由于凝膠在色譜柱中是半透明的，檢查方法可以是將熒光燈與色譜柱平行放置，用肉眼觀察色譜柱內是否有“條紋"或氣泡。也可以將有色大分子添加到色譜柱中。添加物質的分子量應在凝膠柱的分離范圍內。如果在色譜柱中觀察到窄、均勻、平坦的條帶，則說明色譜柱性能良好；如果出現色帶 當凝膠柱規則、凌亂且很寬時，必須重新裝填。
?? 4. 加載樣本
??安裝凝膠柱后，柱子必須與流動相充分平衡，然后才能上樣。凝膠柱的負載也是一個非常重要的因素。一般原則是使樣品柱塞盡可能窄而平。為防止樣品中的一些沉淀物污染色譜柱，一般在上柱前對樣品進行過濾或離心。樣品溶液的濃度應盡可能高較大，但如果樣品的溶解度與溫度有關，則樣品必須適當稀釋，樣品溫度應與色譜柱溫度一致。一切準備就緒后，您可以打開色譜柱的活塞，使流動相剛好與凝膠床平行并關閉出口。用滴管吸取溶液樣品，沿柱壁輕輕加入色譜柱，打開流出口，使樣品溶液滲入凝膠床。當樣品液面正好與凝膠床表面齊平時，再次加入少量洗脫液沖洗管壁。重復上述操作如此，每次關鍵不僅要使樣品準確地滲入凝膠床，而且不要使凝膠床表面干燥和開裂。然后您可以逐漸增加洗脫液的量以進行洗脫。整個過程必須小心，以免損壞凝膠柱床。
?? 5. 沖洗
??凝膠色譜的流動相有一半以上使用水或緩沖溶液，少數使用水和一些極性有機溶劑的混合溶液。此外，還有一些特殊的流動相系統。根據溶液分子的性質確定。加入樣品后，可將色譜床與淋洗液儲存瓶和收集器連接，設定合適的流速，即可對淋洗液進行定量分配和收集。然后根據溶質分子的性質，選擇光學、化學或陶粒過濾方法進行定性和定量測定。
?? 6. 再生
??因為原則上凝膠層析中凝膠和溶質分子之間沒有相互作用，所以在用流動相稍微平衡后可以進行下一步的層析操作。然而，在實際應用中，某些污染物經常會污染凝膠。對于沉積在凝膠床表面的不溶物，可以調整表面凝膠，適當加入一些新的溶脹凝膠，進行再平衡過程；如果整個柱子有輕微污染，可用0.5mol NaCl溶液洗脫。一般情況下，一個凝膠柱可以使用半年。
??如果凝膠柱多次使用，其顏色發生變化，流速降低，表面有污漬等，則必須對凝膠進行再生。凝膠的再生是指采用適當的方法去除凝膠中的污染物，恢復其原有性能。將交聯葡萄糖凝膠廠用溫熱的0.5mol/L氫氧化鈉和0.5mol/L氯化鈉及其混合物浸泡，用水沖洗至中性；而對于聚丙烯酰胺和瓊脂糖凝膠，由于酸堿不穩定，所以通常將其浸泡在鹽溶液中，然后用水洗至中性。
?? 7. 保存
??經常使用的凝膠主要是在潮濕狀態下儲存的。為避免凝膠床被細菌污染，可加入少許氯仿和苯酚或硝基苯等化學品，可使色譜柱站立數月至一年。凝膠的干燥，應先對凝膠進行浮選，去除細小顆粒，并用大量水洗以去除鹽分和污染物，然后逐漸增加濃度一彈簧使凝膠收縮，并在60℃下干燥。 -80 度，在整個操作過程中。房間內的蒸餾水、用具和房間必須干凈。瓊脂糖凝膠的干燥操作比較麻煩，干燥后不易溶解膨脹，所以一般仍以濕潤狀態保存。
?? PW系列凝膠色譜柱填料為親水性剛性多孔球形聚合物，具有優良的化學和機械性能。適用于凝膠色譜模式碳硫分析儀對蛋白質、多肽、多糖、寡糖、DNA、RNA、水溶性有機聚合物等水溶性高分子樣品的分離。 PW系列色譜柱適用的pH范圍為2-12?？墒褂煤?0%的混合有機溶劑作為流動相，操作溫度可達80℃（TSK-gel G-DNA-PW為50℃）。雖然大部分 PW 填料呈弱負性（約 5~8μ eq/mL），但它們對碳硫分析儀對非離子、陰離子和大多數陽離子樣品的分離沒有影響。由于與 SW 色譜柱相比，PW 填料具有非常寬的分離范圍、更線性的校準曲線和低得多的吸附特性，因此 PW 色譜柱常用于分離水溶性合成聚合物。
??相對而言，SW色譜柱適用于碳硫分析儀分離單分散陶粒濾料大分子，如蛋白質等，而PW色譜柱更適用于多分散樣品，如多糖、合成聚合物等。分開了。
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